胃癌（GC）是全球第五大最常見的癌癥，也是癌癥相關(guān)死亡的第四大原因。大多數(shù)GC病例診斷為晚期，導(dǎo)致患者預(yù)后不良。雖然臨床已應(yīng)用了幾種分子靶向藥物，但只有靶向HER2的曲妥珠單抗和免疫檢查點抑制劑（如帕博利珠單抗或納武利尤單抗）顯示出有效的緩解率，并被確定為晚期GC的標(biāo)準(zhǔn)一線治療。因此，迫切需要開發(fā)新的治療靶點和精準(zhǔn)的治療方案，以提高晚期GC患者的生存率。

      Claudins（CLDN）是一類緊密連接蛋白，可調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的選擇性通透性和離子穩(wěn)態(tài)，并介導(dǎo)細(xì)胞間粘附。人類 claudin 基因家族由 27 個已知成員組成，每個成員都以不同的方式選擇性地促進(jìn)帶電和不帶電溶質(zhì)的通過。Claudin 表達(dá)決定了細(xì)胞旁通透性，并且特定 Claudin 家族成員的表達(dá)因組織而異。在胃中，claudin-18（CLDN18.2）是最豐富的形式，而claudin-18.1主要在肺中表達(dá)。然而，由 CLDN18 基因編碼的 claudin-18 （CLDN18.2） 亞型 2 因其位于胃粘膜細(xì)胞的緊密連接內(nèi)，通常無法與抗體反應(yīng)。然而，在惡性轉(zhuǎn)化和細(xì)胞極性喪失期間，CLDN18.2暴露在腫瘤細(xì)胞表面，并在原發(fā)性胃癌及其轉(zhuǎn)移瘤中表達(dá)。這些獨特的特征引起了人們對CLDN18.2作為GC潛在治療靶點的作用的關(guān)注。

      Zolbetuximab是一種首創(chuàng)的嵌合單克隆IgG1抗體，與CLDN18.2結(jié)合，通過抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC）和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性（CDC）機(jī)制誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。一項全球III期隨機(jī)試驗（SPOTLIGHT）的最新結(jié)果顯示，在CLDN18.2陽性和HER2陰性晚期胃癌或胃食管交界處腺癌中，與單獨使用mFOLFOX6相比，唑貝妥昔單抗聯(lián)合mFOLFOX6顯著降低了患者的疾病進(jìn)展或死亡風(fēng)險。

方法學(xué)

      共收集451個GC患者腫瘤組織、342個癌旁組織和107個匹配的轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)。對這些標(biāo)本進(jìn)行 CLDN18.2 表達(dá)染色，并使用免疫組化（IHC）進(jìn)行定量。分析CLDN18.2表達(dá)與臨床病理特征以及免疫相關(guān)因素的相關(guān)性。使用 Kaplan\u2012Meier 方法繪制生存曲線，并使用 Cox 回歸分析確定影響 GC 預(yù)后的獨立因素。

結(jié)論

      CLDN18.2 在腫瘤組織中低水平表達(dá)，可作為 GC 患者的獨立預(yù)后因素。此外，CLDN18.2 與免疫浸潤細(xì)胞和 PD-L1 表達(dá)相關(guān)。

結(jié)果 1 CLDN18.2 在胃腫瘤中低水平表達(dá)，與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)

      在腫瘤組織樣本中，共245個樣本（54.32%）CLDN18.2表達(dá)陽性；206個樣本呈陰性。代表性CLDN18.2的IHC染色如下圖A 所示。在342例有匹配樣本的患者組織中， CLDN18.2在187個（54.68%） 腫瘤組織和 339 個 （99.12%）癌旁組織中表達(dá)。CLDN18.2高表達(dá)（H評分≥6）在腫瘤組織中顯著低于癌旁組織中（下圖B，27.19% vs80.7%，p<0.001），表明CLDN18.2在胃腫瘤中表達(dá)低。CLDN18.2 在胃腫瘤組織和匹配的轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)中表達(dá)無顯著差異（下圖1C，p=0.851）。

      利用 Kaplan?Meier 生存曲線分析CLDN18.2對胃癌生存率的影響。CLDN18.2的陽性表達(dá)與GC患者的總生存期（OS）較短相關(guān)（下圖D，P = 0.026）。然而，CLDN18.2表達(dá)水平高的患者預(yù)后并不明顯低于CLDN18.2表達(dá)水平低的患者（下圖E）。這些發(fā)現(xiàn)表明胃腫瘤組織中CLDN18.2的表達(dá)水平與患者預(yù)后之間存在潛在的負(fù)相關(guān)。

結(jié)果 2 CLDN18.2蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

      基于本研究數(shù)據(jù)，CLDN18.2在胃癌中的表達(dá)水平與各種臨床病理特征幾乎沒有顯著相關(guān)性，但PD-L1表達(dá)水平（p=0.004）除外。值得注意的是，這種缺乏顯著相關(guān)性可能是由于分析中使用的分組變量方法。為了進(jìn)一步研究CLDN18.2表達(dá)水平與特定臨床病理特征之間的關(guān)系，我們分析了與Borrmann型（單樣本t檢驗）、Lauren型（單因素方差分析）和分化等級（單因素方差分析）的相關(guān)性（上圖F-H）。分析顯示，CLDN18.2在Borrmann I型和II型中的表達(dá)水平高于Borrmann III 型和IV型（p = 0.001）。此外，胃腫瘤低分化程度與高CLDN18.2表達(dá)水平之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性（p = 0.0098）。這些發(fā)現(xiàn)表明，CLDN18.2表達(dá)水平與腫瘤分化程度、Borrmann類型和PD-L1 表達(dá)水平相關(guān)。

結(jié)果 3 CLDN18.2是胃癌的獨立預(yù)后標(biāo)志物

      Cox回歸分析被用以探索可能影響胃癌（GC）預(yù)后的因素。在單因素Cox分析中，發(fā)現(xiàn)CLDN18.2陽性表達(dá)與總生存期（OS）顯著相關(guān)（P=0.028）。此外，年齡、pT分期、pN分期、pTNM分期、腫瘤位置和腫瘤大小也被確定為單因素分析中的重要因素（下表，P<0.05）。

      多因素Cox分析進(jìn)一步檢查在單因素分析中顯示顯著性的數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，CLDN18.2表達(dá)與OS（HR = 1.37,95%CI = 1.03–1.81，P = 0.031），以及年齡、pN分期和腫瘤大?。ㄈ缦聢D，P<0.05）之間存在顯著關(guān)聯(lián)。這些發(fā)現(xiàn)表明，CLDN18.2的表達(dá)可能是胃癌的獨立危險因素。

結(jié)果 4 CLDN18.2表達(dá)可調(diào)節(jié)GC免疫微環(huán)境

      根據(jù)TISIDB數(shù)據(jù)庫在對胃癌（GC）患者免疫微環(huán)境的檢查中，觀察到 CLDN18.2 表達(dá)水平與 CD4 + T細(xì)胞、CD8 + T 細(xì)胞和B細(xì)胞之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性。然而，在檢查TIMER數(shù)據(jù)庫時，發(fā)現(xiàn)CLDN18.2表達(dá)水平與CD8 + T細(xì)胞和Foxp3表達(dá)水平相關(guān)（p < 0.05），但與 CD4 + T細(xì)胞、B細(xì)胞、CD274（PD-L1）表達(dá)水平以及ERBB2（HER2）表達(dá)水平無關(guān)。

      在本文對451個GC樣本中使用IHC方法評估HER2表達(dá)和使用聯(lián)合陽性評分（CPS）評估 PD-L1表達(dá)時，發(fā)現(xiàn)HER2和PD-L1表達(dá)水平均未顯著影響患者的總生存期（OS）（下圖 A、B）。HER2和PD-L1在腫瘤組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁組織（p < 0.05，下圖C，F(xiàn)），但與轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)相比無顯著差異（下圖D，G）。本文觀察到CLDN18.2表達(dá)水平和PD-L1 表達(dá)水平呈正相關(guān) （p = 0.004，下圖H），但未發(fā)現(xiàn)與HER2表達(dá)水平的顯著相關(guān)性（下圖E)。

      在使用免疫組化（IHC）對358名患者評估腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）和腫瘤組織中Foxp3 的表達(dá)時，CD4 + T細(xì)胞或CD8 + T細(xì)胞水平高的患者表現(xiàn)出更好的預(yù)后（下圖C，E，p < 0.05）。然而，CD3 + T細(xì)胞水平和Foxp3表達(dá)對GC患者的預(yù)后沒有顯著影響（下圖A，G）。此外，還發(fā)現(xiàn)CD3 + T細(xì)胞和CD8 + T細(xì)胞的數(shù)量與CLDN18.2表達(dá)水平呈正相關(guān)（下圖B，F(xiàn)），但CD4 + T細(xì)胞和Foxp3并不適用（下圖D，H）。

結(jié)果 5 CLDN18.2- + CD4high狀態(tài)和CLDN18.2- + CD8high狀態(tài)的患者預(yù)后更好

      本文在研究CLDN18.2與腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）、PD-L1、HER2或Foxp3對胃癌（GC）預(yù)后的聯(lián)合影響時進(jìn)行了Kaplan?Meier生存分析（如下圖）。分析表明，CLDN18.2−+ CD4high組預(yù)后最好，5年總生存率（OS）為61.0%。相比之下，CLDN18.2 + +CD4low組預(yù)后最差，5年OS率為45.3%（下圖A，P = 0.036）。CLDN18.2聯(lián)合CD8+T細(xì)胞的預(yù)后分析顯示相似的結(jié)果。The CLDN18.2−+ CD8high組患者預(yù)后最好，5年OS率為62.2%（下圖C，p = 0.034）。另一方面，CLDN18.2 與 CD3 + T 細(xì)胞、HER2、PD-L1 或 Foxp3 的聯(lián)合分析未顯示預(yù)后有統(tǒng)計學(xué)意義的差異（下圖A， D-F， p > 0.05）?？傊?，CLDN18.2陰性狀態(tài)與高水平的CD4 + T細(xì)胞或CD8 + T細(xì)胞相結(jié)合，預(yù)示著GC的預(yù)后良好。

參考文獻(xiàn)

Wang C, Wang Y, Chen J, Wang Y, Pang C, Liang C, Yuan L, Ma Y. CLDN18.2 expression and its impact on prognosis and the immune microenvironment in gastric cancer. BMC Gastroenterol. 2023 Aug 16;23(1):283. doi: 10.1186/s12876-023-02924-y. PMID: 37582713; PMCID: PMC10428652.